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紫外可見分光光度計定量、定性分析需注意的問題

更新時間:2018-03-21點擊次數:2950
       使用紫外可見分光光度計進行定量和定性分析需注意以下一些問題: 

  吸光度讀數范圍:吸光度測量誤差在透過率過大或過小時都會變大,為了滿足定量分析的誤差要求<5%),在定量分析時要求吸光度應在一定的范圍內這個范圍的具體值與儀器性能有關,主要是與紫外可見分光光度計檢測系統噪聲大小有關,但通常都在0.1~1.0范圍內,如果儀器的檔次更低,則范圍更窄。根據朗伯比爾定律,影響吸光度大小的因素主要是樣品摩爾吸光系數,濃度和比色皿光程。實驗中吸光度過大的樣品可通過稀釋樣品使吸光度到所需范圍內。如果樣品不能稀釋,可以改用光程較小的比色皿減小吸光度。吸光度過小的樣品可使用光程較大的比色皿以增大吸光度。

  吸收波長的選擇:進行單波長測量時,需要考慮朗伯比爾定律對入射光單色性的要求和測定靈敏度的要求。沒有干擾時,一般選擇在吸收峰的zui大吸收波長位置處,如果有干擾,選擇在沒有干擾且吸光度變化較平緩的位置。 進行多波長校正時,除盡量滿足單波長測定的波長要求外,還要求多個組分間的吸收光譜間線性無關。 

  狹縫的選擇:狹縫的大小會影響到儀器的信噪比和標準曲線的線性范圍。狹縫過大,通常會使線性范圍變小,特別是當不在zui大吸收波長位置測定時更是如此。狹縫過小,信噪比變差,基線平直度和測量數據的重復性會變差。此外,還需要考慮樣品吸收峰寬度的影響。通常單波長測定時,一般選擇在zui大吸收波長位置,線性范圍容易滿足,可選擇較寬的狹縫(1~2nm)多波長測定時,很難同時在所有波長都滿足線性范圍要求,應選擇較小的狹縫。 

  重復測定次數和波長掃描速度:對吸光度不是很大的樣品,或者狹縫不是很小,這是檢測器檢測的光信號的強度是比較大的,重復性較好,可選擇較少的重復次數。相反,如果樣品吸光度很大,狹縫很小,選擇較大的重復次數可獲得更好的結果。 

  測定波長間隔:在掃描光譜時需要選擇,可根據樣品吸收峰的寬度進行選擇,峰寬較大時,可選擇較大的波長間隔。反之亦反。通常每個正常的吸收峰應該用不少于30個數據點表示出來。

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